7.4. Анализ препаратов для мягчения и мягчильной жидкости

7.4.1. Определение активности поджелудочной железы и панкреатина

Приготовление ферментной вытяжки из поджелудочной железы. На волчке или в мясорубке измельчают примерное количество железы, равное расходуемому в один день. Затем из разных участков отбирают среднюю пробу массой 10 г и заливают 1 л 2%-ного раствора сульфата аммония.

При определении активности сухих мягчителей (технического панкреатина и др.) также отбирают среднюю пробу из разных участков, из которой для анализа берут 10 г и заливают 1 л 2%-ного раствора сульфата аммония. Извлечение фермента из всех видов мягчильных препаратов производится в течение 1 ч при температуре 37 - 38°С.

Перед анализом к 100 мл полученной ферментной вытяжки (поджелудочной железы, технического панкреатина и др.) добавляют 900 мл производственной воды.

Для анализа в два стакана вместимостью 125 мл пипеткой отбирают по 20 мл разбавленной ферментной вытяжки мягчильного препарата, отфильтрованной через марлю, и добавляют по 40 мл 5%-ного щелочного раствора казеина при температуре 37 - 38°С. Затем один стакан (опытный) ставят в термостат на 1 ч при температуре 38°С, а содержимое другого стакана (контрольного) немедленно осаждают добавлением точно 20 мл 0,2 н, соляной кислоты и 10 мл 15%-ного сульфата натрия и после перемешивания раствора отфильтровывают выпавший осадок казеина. Через 1 ч выдерживания в термостате тем же способом осаждают казеин в опытном стакане. Осадок отфильтровывают и в 50 мл фильтрата, взятого из обоих стаканов, оттитровывают кислоту. Титрование производят 0,1 н. раствором гидроксида натрия с добавлением 5 капель индикатора 0,5%-ного спиртового раствора крезолового красного (титруют до красного цвета раствора) или 1%-ного спиртового раствора α-нафтолфталеина (титруют до зеленовато-синего цвета раствора), или 0,04%-ного водного раствора бром- тимолового синего (титруют до синего цвета раствора).

Разница в количестве гидроксида натрия, израсходованного на титрование 10 мл опытного и контрольного фильтратов, выраженная в миллилитрах точно 0,1 н. раствора гидроксида натрия, характеризует активность исследуемого препарата:

где а₂ и а₁ - объем 0,1 н. раствора гидроксида натрия, израсходованный на титрование соответственно опытной и контрольной пробы

(50 мл), мл; k - поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидроксида натрия.

Приготовление 5%-ного щелочного раствора казеина. В фарфоровый стакан вместимостью 250 мл помещают 50 г отвешенного на технических весах казеина (технического белого цвета, измельченного в дезинтеграторе или в ступке) и добавляют 25 мл воды. После 20 - 30 мин набухания казеина в воде добавляют еще 25 мл воды и ставят стакан в водяную баню при температуре 60 - 70°С, затем постепенно при перемешивании прибавляют 50 мл 1 н. раствора гидроксида натрия. По мере загустевания казеинового раствора небольшими порциями добавляют теплую воду.

После растворения казеина доводят объем раствора в мерной колбе до 1 л (необходимо следить, чтобы не оставалось нерастворенных кусочков казеина).

Для предохранения раствора от гниения в него добавляют кристаллик тимола или несколько капель толуола. Раствор казеина можно хранить не более двух дней, рН казеинового раствора 8 - 8,2.